gcg钜富外汇使用 GraphPad Prism 对生成的 HCBF 和 Texas Red 细胞增殖曲线的斜率之间的差异进行统计分析无论琢磨癌细胞的增殖胁制，仍然探究神经细胞的转移机制，乃至是评估药物对细胞成效的影响，96 孔微孔板都是不行或缺的用具，但运用进程中也会呈现 bug（
我用 96 孔板成像的时间，孔边沿的细胞老是由于暗影而无法切实计数。我试了各类要领，软件措置、调度光照……但措置后的数据也不敷牢靠啊。
这实在是微孔板孔内的弯液面效应，当咱们把细胞作育液插手孔中时，液体与孔壁接触就会酿成弯液面。孔壁是亲水的，液体分子对孔壁的吸引力大于液体分子间的吸引力，这就导致孔边沿的液体厚度比中央区域薄。当咱们正在显微镜下成像时，光泽穿过液体时会爆发折射，使得孔边沿的细胞由于光照亏空而酿成暗影。这些暗影会作梗咱们的成像和细胞计数，导致数据不切实。
实在换一个 96 孔 Agilent InteroCyte 无暗影成像微孔板就能彻底清除成像区域中的暗影，让你明了看到每一个细胞，无论是孔中央仍然边沿。
为了餍足琢磨职员对高牢靠性细胞增殖领悟治理计划的需求，安捷伦拓荒出了 96 孔 Agilent InteroCyte 无暗影成像（SFI）微孔板。这款微孔板采用怪异的孔打算，可轻松清除成像区域中弯液面变成的暗影，领悟时运用 96 孔板规格的常用体积（图 1），且无需实行任何图像措置。这款微孔板的长宽尺寸还合适 ANSI/SLAS 微孔板尺度，是以不但能够与安捷伦成像体例（比如 BioTek Cytation 和 Lionheart 体例以及 xCELLigence RTCA eSight）搭配运用，还能兼容任何显微镜体例。
本次评估运用的是 HeLa 细胞，这种细胞始末基因改制能够外达血色荧光卵白（RFP），其信号能够被 Texas Red 成像模块搜捕。细胞作育运用 Eagle 最低限定底子作育基（ATCC，货号 30-2003），遵守供应商引荐的计划增添 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 青霉素/链霉素（pen/strep）举动作育基添加因素。
运用 Agilent BioTek Lionheart FX 全主动智能成像领悟体例上的宽场（WFOV）相机搜捕图像。运用安捷伦 4x 平场扩展型复消色差气氛物镜（货号 1220573）搜捕全豹图像。高对照度明场（HCBF）成像模块用于搜捕无标帜图像，而荧光成像模块以及安捷伦 590 nm LED 模块（货号 1225002）和 Texas Red 滤光片模块（货号 1225102）则用于搜捕荧光图像。
将细胞以 2,000 个细胞/孔的密度接种到三块 InteroCyte 无暗影成像 微孔板（货号 204973-100）的 16 个孔中，以及三块含有圆柱形孔的竞品 96 孔透后微孔板（比较孔板）中，每孔接种体积为 250 µL，该体积是无暗影成像的最低请求。接种后让细胞正在生物安好柜中室温静置一小时使其重降至孔板底部，随后改观至 37°C/5% CO2 作育箱中作育。作育时期每 24 h 推行一次 50% 体积作育液改换。
运用前述物镜和成像形式，纠合 2 行 × 2 列的 4x 图像拼接技艺完结百般孔板的全孔成像。正在 72 h 考查期内，每 24 h 运用默认主动对焦要领采撷一次图像，以追踪细胞增殖动态。同时，通过低落焦距使细胞和配景亮度之间到达最大对照度来采撷第二组高对照度明场图像[1]。完结图像采撷后，将全豹图像拼接正在一道。然后运用无标帜要领或荧光成像要领对视野内的细胞总数实行定量领悟。
通过对照 InteroCyte 无暗影成像微孔板采撷的 4x HCBF 拼接图像（图 3A），咱们能够清爽看到 InteroCyte 无暗影成像 微孔板从孔中央到边沿均涌现平均照耀成绩。外达 RFP 的细胞无论位于孔内哪个身分，正在 Texas Red 通道（图 3B）和 HCBF 通道中均明了可辨，越发是孔边沿区域仍连结优异成像质料。
比拟之下，正在比较孔板采撷的 HCBF 拼接图像（图 3C）中可 以显着看到孔周遭的弯液面暗影。这种暗影现实上遮盖了孔外缘的细胞，正在 Texas Red 通道中可看到这些细胞。
运用一样领悟尺度对采撷的图像实行细胞领悟时，可显着定量弯液面暗影对数据质料的影响（图 4）。
比拟之下，正在代外性比较孔板中，运用 HCBF 通道时孔内计数细胞数（8711）仅为 Texas Red 通道计数细胞数（10156）的 85.8%。
琢磨发掘， InteroCyte 无暗影成像微孔板确实能够淘汰作梗成分对结果褂讪性的影响。凭据细胞增殖琢磨中的测试板数据，绘制细胞计数随时刻改观的弧线C 显示，正在 InteroCyte无暗影成像微孔板采撷的 HCBF 和 Texas Red 图像中，细胞计数结果高度相似。
而图 5D–5F 则显示了比较孔板中细胞计数的明显差别。运用 HCBF 通道成像时，孔边沿的细胞正在全体琢磨进程中都未被计数。跟着这些细胞不休增殖，细胞计数的差错越来越大。
运用 GraphPad Prism 对天生的 HCBF 和 Texas Red 细胞增殖弧线的斜率之间的差别实行统计领悟，相当于协方差领悟（外 1）[2]。
运用比较孔板天生的细胞增殖弧线实行较量的 p 值均小于 0.0001。凭据既定尺度，两条弧线之间具有明显差别，由于它们的 p 值小于 0.001。另一方面，每块 InteroCyte 无暗影成像 微孔板谋略得出的 p 值均大于 0.4，凭据尺度（p 值大于 0.05），区别成像通道之间无明显差别。
图 3C 中的图像采撷自柱形孔比较孔板，揭示了运用守旧微孔板带来的题目。弯液面仍正在成像区域内，酿成的暗影窒碍了孔边沿的寻常照耀。这种效应会导致细胞计数淘汰（图 4C 和 4D），并对细胞增殖弧线），进而导致对测试细胞类型的孕育速度或测试分子对倾向细胞的影响做出舛错判定。
比拟之下，图 3A 中的图像显示了 InteroCyte 无暗影成像微孔板怪异的孔几何样子怎么供应照耀平均的全孔图像。无论是运用 HCBF 通道（图 4A）仍然 Texas Red 通道（图 4B），都能够轻松考查并计数孔边沿的细胞。是以，琢磨职员能够齐全笃信运用无标帜要领得回的细胞计数结果和细胞增殖弧线）不但数据切实，并且具有优异的反复性。
综上，咱们能够看出 Agilent InteroCyte 无暗影成像微孔板为完毕无暗影全孔图像供应了牢靠治理计划。怪异的孔打算清除了成像孔中弯液面发生的影响，领悟时运用细胞领悟就业流程中的常用体积即可。
正在实行无标帜细胞领悟试验（如细胞增殖和毒性评估）时，可得回切实、牢靠的数据。除了荧光成像外，InteroCyte 无暗影成像微孔板还扶助体积小于 250 µL 的非全孔、无标帜成像。除了荧光成像外，InteroCyte无暗影成像微孔板还可用于体积小于 250 µL 的其他向例成像运用，譬喻对每孔的一一面实行无标帜成像。举动治愈 96 孔板成像胆怯症的「良药」，它轻松治理了弯液面暗影带来的细胞计数反对、操作繁琐、功用低下的题目，让试验变得纯粹又高效，点此立时申请试用。
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